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蔗糖系列

蔗糖是重要的光合产物,为植物体内运输的主要物质,又是碳水化合物的暂贮形式之一。蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶是植物体内催化其合成的两种酶。这两种酶在生物体内的功能有所不同。蔗糖合成酶以游离果糖为受体,蔗糖磷酸合成酶以果糖-6-磷酸为受体,后者形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸合成酶的作用下形成蔗糖。蔗糖转化酶在植物中能够不可逆的催化蔗糖的水解反应,生成葡萄糖和果糖。

糖类物质标准品和样品色谱图


糖类物质标准品和样品色谱图


蔗糖合成酶和酸性转化酶活性变化


蔗糖合成酶和酸性转化酶活性变化


迪信泰检测平台采用高效液相色谱的方法,使用Agilent 1260 Infinity型高效液相色谱仪对样品进行分离,蒸发光散射检测器(ELSD)对样品进行鉴定,可高效、精准的检测蔗糖类代谢物质的含量变化。目前可检测的蔗糖类物质包括蔗糖、蔗糖合成酶、可溶性酸性转化酶等。对于蔗糖合成或代谢所需的酶类物质,迪信泰检测平台可提供定制检测或结合相应的试剂盒,使用生化的方法检测,以满足您的不同需求。

样品制备

蔗糖类(蔗糖、果糖、葡萄糖)提取方法(此部分涉及到公司的核心工艺,以下提供常规的提取工艺)

1) 称取500 mg的固体样品;
2) 加入5 mL去离子水;
3) 超声处理30 min;
4) 取2 mL,用乙腈定容至10 mL;
5) 用HPLC-ELSD检测。

迪信泰检测平台可检测蔗糖类项目

蔗糖合成酶(合成方向 )活性检测

测定意义:蔗糖合成酶的主要是进行蔗糖合成及催化蔗糖分解,属于重要的蔗糖代谢酶之一。在蔗糖合成中主要起到脱水缩合的催化作用。

测定原理:SS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。

蔗糖磷酸化酶活性检测

测定意义:蔗糖磷酸化酶属于一种游离的酶,该酶主要存在于细胞液泡或细胞质中,用于降解液泡中蔗糖,最适pH为4.5~5.0。

测定原理:AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与AI活性成正比。

蔗糖磷酸合成酶(SPS)活性检测

测定意义:蔗糖磷酸合成酶主要是以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖。

测定原理:蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。

蔗糖酶活性检测

测定意义:蔗糖酶是生物体内的碳水化合物消化吸收的关键酶之一,主要是将蔗糖水解为相应的单糖,从而被生物机体吸收。

测定原理:采用3.5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶催化产生的还原糖的含量,由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是3.5-二硝基水杨酸与还原糖共热被还原成棕红色的氨基化合物,在一定范围内还原糖的量和反应液的颜色深度成正比。此法操作简便、迅速、杂质干扰较小。

可溶性酸性转化酶(AI)活性检测

测定意义:可溶性酸性转化酶在酸性条件下活性较高,其最适pH为3~5。在细胞质基质中,主要起到降解液泡中蔗糖的作用。通过调节蔗糖的利用率,来进一步实现植物体内的糖累积。

测定原理:可溶性酸性转化酶催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与可溶性酸性转化酶活性成正比。

中性转化酶(NI)活性检测

测定意义:中性转化酶主要存在于植物体的细胞质基质中,将植物体内的蔗糖降解为果糖和葡萄糖。

测定原理:中性转化酶催化蔗糖分解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收值与还原糖生成量成正比。通过光吸收增加速率来计算中性转化酶活性。

细胞壁不溶性酸性转化酶(B-AI)活性检测

测定意义:细胞壁不溶性酸性转化酶主要是以结合态的形式存在于植物细胞的细胞壁上,通过催化分解蔗糖,以维持细胞内外稳定的蔗糖浓度。

测定原理:细胞壁不溶性酸性转化酶催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与细胞壁不溶性酸性转化酶活性成正比。

葡萄糖含量检测

测定意义:葡萄糖含量的测定即可用生化法也可用高效液相色谱法。生化法主要采用I2与NaOH溶液作用生成NaIO,NaIO可将葡糖糖定量氧化为葡萄糖酸,在酸性条件下,未与葡萄糖作用的次碘酸钠可转变为单质碘析出,因此只要用硫代硫酸钠标准溶液滴定析出的碘,便可计算出葡萄糖的含量。

测定原理:葡萄糖在540nm紫外下有吸收,可以利用高效液相色谱法测定其含量。

果糖含量检测

测定意义:果糖是一种含6个碳原子的单糖,是天然化合物中甜味最高的糖,存在于蜂蜜、水果、浆果、瓜类以及一些根类蔬菜中。果糖为白色结晶,甜度高,有水果香味。

测定原理:果糖在盐酸的作用下生成羟甲基糖醛,其最大吸收波长在 291nm,可以利用高效液相色谱法测定其含量。

蔗糖含量检测

测定意义:蔗糖是经盐酸水解转化为还原糖,再按还原糖进行测定。水解前后还原糖的差值即为蔗糖含量。

测定原理:利用示差折光检测器测定蔗糖含量。

HPLC测定蔗糖系列样本要求:
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL,测定样品不返还,请您保留备份。

周期:2~3周

项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告,报告包括:
1. 实验步骤(中英文)
2. 相关质谱参数(中英文)
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 蔗糖系列含量信息

迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案,具体请咨询技术支持181-0124-5990
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